Troubleshooting en HPLC
Si usas un HPLC, y trabajas con fases mixtas (dos solventes mezclados), seguramente sabes que es importante tener un degasser para quitar el aire de los solventes.
Si no tenés un degasser... ¿es equivalente desgasificar cada solvente por separado, con una bomba de vacío, para que luego se mezclen en la bomba, ya sin el aire disuelto?
Lamentablemente no... La solubilidad del aire (O2, N2) en cada solvente, no es la misma que la solubilidad en la mezcla (donde suele ser menor). Además, la solubilidad a presión atmosférica es diferente a la solubilidad en condiciones de vacío (que son las condiciones del degasser). Lo que ocurre es que, al vacío, parte del oxígeno disuelto suele salir de la fase líquida y pasar a la fase gaseosa (formando burbujas).
Las burbujas de aire traen problemas en la bomba (con síntomas como corrimientos en tiempos de retención debidos a problemas en el bombeo), y en el detector (línea de base ruidosa, incluso quenching de la fluorescencia por parte del oxígeno cuando se usa un FLD).
En la siguiente imagen se ve un test de diagnóstico del degasser, canal por canal.
A la izquierda, la composición es 100 % agua, y a la derecha, metanol puro. En el eje “Y” se representa la presión, y la variación de la misma debería ser suave. Cuando hacemos un diagnóstico del estado de un degasser, monitoreamos cada canal por separado, para detectar cualquier problema.
Fijate cómo el comportamiento es distinto, dependiendo del canal del degasser que se usa. Claramente, uno de los tres canales (en este caso, el C), no funciona.
Si el degasser es el original del equipo, dependiendo del fabricante, la solución podría ser el reemplazo de las cuatro cámaras del degasser, aunque esto podría traer otro problema: si la bomba del degasser está dañada, el problema podría repetirse en el futuro.
Lo ideal es contar con un degasser que posea cuatro cámaras independientes, como el que se ve en la siguiente imagen.
Muchas veces, los fabricantes recomiendan el reemplazo del módulo completo. En esos casos, podemos instalar el kit de reparación en un degasser de otras marcas de HPLC, lo que es más conveniente en términos de inversión.
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