HPLC. ¿Mala repetibilidad en tiempos de retención?

Muchas veces recibimos llamados de clientes que nos dicen que su HPLC no está funcionando correctamente porque los tiempos de retención de los picos no son reproducibles o las áreas varían. La gran mayoría de las veces este problema se da cuando la presión del sistema no es estable. ¿Qué significa esto?

La presión debe ser constante (mientras no se varíen las condiciones del análisis como temperatura, flujo, proporción de solventes, etc.). Además, no debe variar más de 1bar. Para entender este concepto, abajo una imagen de la señal de la presión en una bomba.

La bomba estaba estabilizándose. La variación de presión es cada vez menor hasta el minuto 51 aproximadamente cuando por alguna razon, se desestabiliza.

Normalente los usuarios no monitorean la presión y por ende no perciben estas desestabilizaciones que pueden darse, por ejemplo, por mala degasificación, una pérdida, defectos en la bomba, etc. Entonces atribuyen el problema de tiempos de retención al mal funcionamiento del equipo cuando quizás el único inconveniente era la falta de tiempo de estabilización de la presión (problemas en las primeras inyecciones) o una incorrecta degasificación (problemas en algunas inyecciones al azar).

Cuando los problemas están en todas las inyecciones, es probable que haya algún inconveniente en el equipo, y la solución podría ser el reemplazo de una parte defectuosa.

Abajo hay una imagen de la presión de una bomba que funciona bien (señal roja) y una defectuosa (señal azul):

Las señales están a la misma escala y desfasadas para que no se superpongan.